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Overview

Product name R-PE-Antibody conjugation Kit / R-PE 抗体标记试剂盒
Catalog no APL001-100
Size 100 μg

Applications

相关介绍 免疫荧光标记技术（immunofluorescence technique）是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素，当与其相对应的抗原或抗体起反应时，在形成的复合物上就带有一定量的荧光素，在荧光显微镜下就可以看见发出荧光的抗原抗体结合部位，检测出抗原或抗体。该技术的主要特点是：特异性强、敏感性高、速度快。 荧光素标记抗体简称荧光抗体（FA），是目前广泛用于免疫病理、细胞化学、流式细胞学、病毒学及自身抗体的临床免疫诊断之中的特异、灵敏、定性和定位相结合的免疫化学试剂。用于标记的抗体，要求是高特异性和高亲和力的。所用抗血清中不应含有针对标本中正常组织的抗体。一般需经纯化提取IgG、IgM后再作标记。 本试剂盒中的荧光素采用高质量的藻红蛋白(R-phycoerythrin,R-PE)，R-PE是从红藻中分离纯化的，是目前普遍使用的荧光标记试剂。R-PE蛋白的亚基组成为（）6，每个、亚基分子量为20KDa，每个亚基分子量为30KDa，总分子量为240KDa。R-PE吸光度和荧光量子产率很高，荧光强而稳定，灵敏度高。其最大激发波长为565nm，最大荧光发射峰为575nm。
试剂盒组份 APL001-100、APL001-200详细组分： APL001-500、APL001-1000详细组分：
注意事项 1）本试剂盒需2-8℃保存，勿冻存； 2）试剂盒各组份在运输过程中可能造成内容物（液体或干粉）附着于管壁或瓶盖上，使用前请低速离心数秒，以使附着的液体或干粉试剂集中至容器底部； 3）本试剂盒中PE需避光低温保存，标记过程尽量保证其避光； 4）抗体修饰剂以及封闭剂均需现用现溶，干粉溶解后需尽快使用； 5）为保证标记效果，建议使用的抗体特异性高且纯度不低于90%； 6）抗体溶液中不宜含有游离氨基与游离巯基，如抗体保存缓冲液中涉及BSA，需提前去除； 7）抗体修饰后所带的基团容易被重新氧化，影响后续标记效果，建议修饰后抗体尽快与活化PE进行偶联； 8） 本试剂盒中部分试剂直接接触皮肤有一定危害性，建议实验过程中做好防护措施，如佩戴口罩与手套；其中DMSO溶剂属微毒类，对人体皮肤有渗透性，使用时应避免与皮肤、眼睛和黏膜接触。 需自备物品 1. 高精度移液器及一次性吸头：0.5-10μL、2-20μL、20-200μL、200-1000 μL 2. 恒温箱（带混合反应器） 3. 离心机（可满足1.5mL离心管离心，转速不低于5000rpm） 试剂盒操作流程 1.抗体的修饰 1）取待标记抗体，用pH7.2-7.4的PBS调整抗体浓度至1-5mg/mL（抗体浓度应不低于1mg/mL）； 2）从试剂盒中取出抗体修饰剂（A），低速离心机离心数秒，使管内干粉集中至管底，向管中加入100μL去离子水，用移液枪反复吹打或涡旋混合器混匀至完全溶解，制成抗体修饰剂溶液； 3）根据待标记抗体量，参考如下表格向抗体中加入抗体修饰剂（A）溶液，涡旋或枪头吹打混匀后，37℃全程混合反应1.5小时； 4）反应完成后，取出试剂盒中的抗体脱盐柱(B)，向脱盐柱添加0.1mL标记缓冲液(C)，2000-4000rpm离心30s-1min，弃去滤出液；将反应完成的抗体转移至抗体脱盐柱中填料表面，以2000-4000rpm离心1-2min收集滤出液即为修饰后抗体。 注：抗体脱盐柱使用方法 ①向脱盐柱加入0.1mL标记缓冲液，2000-4000rpm离心30s-1min，拿起套管中含填料的部分，将底部滤出液弃去，重新将套管放回； ②向填料表面加入修饰后抗体，如修饰后抗体体积小于50μL，补加标记缓冲液(C)至体积为100μL, 以2000-4000rpm低速离心1-2min收集滤出液。 抗体脱盐柱从试剂盒中取出时，由于运输可能造成上下颠倒，存在胶面不平整或有气泡的情况，均为正常现象，按照以上步骤4）正常操作即可。 2.修饰后的抗体与PE偶联 1）将装有活化PE(D)溶液的棕色试剂管，低速离心数秒使得溶液集中于管底，将活化PE（D）转移至标记反应管(E)中，并向管(E)缓慢滴加以上步骤1.得到的修饰后抗体，加入完成后立即涡旋混匀，室温避光全程混合反应2小时； 2）取出试剂盒中的封闭剂(F)，低速离心机离心数秒，使管内干粉集中至管底，向管中加入100μL DMSO(G)，涡旋或枪头吹打混匀使封闭剂(F)完全溶解，配成封闭剂溶液； 3）加入1μL的封闭剂(F)溶液至2.1的反应产物中，室温避光全程混合反应30分钟； 4）将以上混合物转移至棕色试剂管或包裹铝箔纸中置于2-8℃保存待用。

image of R-PE-Antibody conjugation Kit / R-PE 抗体标记试剂盒

¥1200.00

R-PE-Antibody conjugation Kit / R-PE 抗体标记试剂盒

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